western原理和步骤

Western blot（也称为蛋白质免疫印迹）是一种常用于研究中分离和鉴定蛋白质的技术。它利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 来分离指定样品中包含的各种蛋白质，然后将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或 PVDF 膜上，接下来将膜与对感目标蛋白质的特异抗体一起孵育。

操作步骤：

1.准备样品

1）制冰，准备冰盒。

2）配制细胞裂解液：根据细胞数量确定所需裂解液：50ul/六孔板一孔 。

裂解液配方：100ul碧云天裂解液+1ul蛋白酶抑制剂混合物+1ul PMSF

3）按实验需要准备好细胞：去掉培养基，1×PBS洗3次（去掉培养基中的血清），每个孔（6孔板）加入适量的裂解液。迅速用细胞刮刮下细胞并转移至1.5ml管中，置于冰上20min，振荡混合后，再置冰上10min。

4）12，000g，4℃离心15min，收集上清至另一1.5ml管。